thermo内切酶mss i的说明书

Thermo Scientific的内切Mss I内切酶，货号ER1701，说明书一支40 µL装、内切浓度10 U/µL的说明书管子，官网标价大概在六百块人民币上下。内切这价格不算便宜，说明书但搞分子克隆的内切人心里都有数——限制性内切酶这东西，贵有贵的说明书道理。

Mss I识别的内切是5'-GTTT^AAAC-3'这段序列，切割位点就在第二个T和第三个A之间。说明书注意，内切它产生的说明书是平末端，不是内切粘性末端。这点很关键，说明书因为很多刚入门的内切同学拿到酶第一反应是看有没有星号活性，却忽略了末端类型对后续连接实验的影响。平末端连接效率比粘性末端低一个数量级，这是客观事实，不是操作能弥补的。

我自己的使用体验是，这酶对甲基化状态相当敏感。dam甲基化会完全抑制它的切割活性，所以如果你从常规的JM109或DH5α菌株里提质粒，且菌株是dam+，那Mss I基本就是废的。你得用dam-菌株，比如JM110，或者干脆买别人预切好的载体。我去年做基因合成片段拼接时，就吃过这个亏——质粒提出来跑胶一看，全是一条大带，酶切根本没发生。后来查了说明书里的小字注释，才发现是dam甲基化在捣鬼。

反应条件方面，它用的是提供的缓冲液Tango，这玩意儿是Thermo的通用缓冲液，兼容性做得不错。37°C孵育，标准反应时间是1小时。但说句实在话，我一般会延长到2小时，尤其是切基因组DNA或者大规模酶切时，过夜也不是不行——只要酶量控制得当，过夜不会产生星号活性。这酶的星号活性阈值大概在过量20倍以上才会出现，比某些廉价品牌的酶要皮实得多。

热失活是另一个容易忽略的点。Mss I在65°C加热20分钟就能完全失活，这点比很多需要80°C处理的酶要方便。我习惯酶切完直接加loading buffer上样跑胶，如果要回收片段，65°C灭活后可以直接进行后续的连接或转化，不用过柱纯化。省时间，也减少DNA损失。

还有个细节——这酶对NaCl浓度有要求。说明书推荐的Tango缓冲液里NaCl是100 mM，但如果你用的是其他缓冲液体系，比如NEB的CutSmart，那NaCl只有50 mM，Mss I的活性会下降大概30%。别问我怎么知道的，有一次图省事用了NEB的buffer，切了3小时条带还是模糊的。后来老老实实换回Tango，半小时就切得干干净净。

最后说说储存。这酶必须放在-20°C，而且不能反复冻融。我习惯分装成5 µL的小管，用一次扔一管。别嫌浪费，酶这东西一旦活性下降，你后续实验全得返工，时间成本远大于那几百块钱。Thermo的酶稳定性在同类产品里算好的，我放过一年活性也没明显下降，但前提是你别整天开着冰箱门拿进拿出。

说到底，Mss I不是那种天天用得上的酶，但一旦你需要平末端切割，或者处理特定序列，它就变得不可替代。实验室里备一支，放在酶盒的固定位置，标注好日期，比临时抱佛脚到处借酶要靠谱得多。